貨號(hào)：59824 快速亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化試劑盒 (50)

英文名稱：EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit (50)
中文名稱：快速亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化試劑盒 (50)
品     牌：Qiagen
貨     號(hào)：59824

對(duì)來自基因組DNA、福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）樣本、細(xì)胞或組織樣本的DNA進(jìn)行超快速、高效的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化

 優(yōu)化的操作流程對(duì)胞嘧啶轉(zhuǎn)化率超過99%

 新型Bisulfite Solution可在少至30分鐘內(nèi)完成有效地亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化

 可用于基因組DNA、全血、培養(yǎng)細(xì)胞、組織樣本和福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片

 快速、簡(jiǎn)潔的操作流程，有效轉(zhuǎn)化和純化DNA

 獨(dú)特的DNA Protect技術(shù)可防止DNA降解

EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits可在少至30分鐘內(nèi)將未甲基化的胞嘧啶高效轉(zhuǎn)化成尿嘧啶，起始材料選擇也有出色的靈活性。簡(jiǎn)化的樣本裂解操作流程和直接的DNA亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化使轉(zhuǎn)化過程快速、省力，樣本包括全血、培養(yǎng)細(xì)胞、組織樣本、基因組DNA和福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片。創(chuàng)新的DNA Protect技術(shù)確保有效的DNA變性而不會(huì)降解，得到高產(chǎn)量DNA和可重復(fù)性結(jié)果。此外，轉(zhuǎn)化DNA可在少至10 μl洗脫緩沖液中洗脫，得到高濃度DNA。
 

性能

高效亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化 

在甲基化分析中，對(duì)DNA亞硫酸氫鹽處理，將未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化成胞嘧啶是最關(guān)鍵的步驟，因?yàn)榉磻?yīng)效率會(huì)對(duì)下游分析的可靠性造成很大影響。EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits含有的創(chuàng)新型Bisulfite Solution可進(jìn)行超快速、高效的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，甚至可處理難分析的樣本，如來自女性樣本的X染色體基因組DNA，因?yàn)?/span>2個(gè)X染色體中有一個(gè)是高度甲基化的（參見Highly efficient cytosine conversion of X chromosome DNA）。焦磷酸測(cè)序?qū)Π奏まD(zhuǎn)化定量分析表明，與其他供應(yīng)商的試劑盒相比，EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kit的轉(zhuǎn)化效果明顯更好，特別是當(dāng)起始材料的量很有限時(shí)（參見Superior bisulfite conversion）。

DNA片段化減少

完全亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化所需的劇烈條件通常會(huì)造成高度DNA片段化和樣本損失，導(dǎo)致DNA產(chǎn)量低、高度片段化DNA以及不可重復(fù)的轉(zhuǎn)化率。QIAGEN獨(dú)特的DNA Protect Buffer可防止DNA降解，與其他供應(yīng)商的試劑盒轉(zhuǎn)化的DNA相比，可獲得更大片段大小的完全轉(zhuǎn)化DNA（參見Analysis of DNA fragment sizes after bisulfite conversion）。

原理

DNA樣本的快速、完全的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化對(duì)于準(zhǔn)確的DNA甲基化分析是必需的。EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits含有的創(chuàng)新型Bisulfite Solution可在少至30分鐘內(nèi)完成高效的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化。簡(jiǎn)化的樣本裂解和轉(zhuǎn)化操作流程可對(duì)DNA進(jìn)行有效純化和亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，而獨(dú)特的DNA Protect技術(shù)可最大程度減少亞硫酸氫鹽處理時(shí)的DNA片段化。3種EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits相互聯(lián)系，形成的完整系統(tǒng)可對(duì)一系列起始材料的DNA進(jìn)行直接亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化（參見Interconnected protocols of the EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits）。但每種試劑盒特有其獨(dú)特之處，重點(diǎn)處理特定樣本類型，各自含有需要的所有緩沖液和試劑。每個(gè)試劑盒的組分可有效裂解樣本，減少DNA損失，進(jìn)行完全亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，并在轉(zhuǎn)化及DNA回收過程中形成有效保護(hù)。

快速亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化

EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits提供非?？焖?、簡(jiǎn)潔的操作流程，可有效轉(zhuǎn)化并純化來自基因組DNA、福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片、血液、細(xì)胞或組織樣本中的DNA。試劑盒含有高濃度的Bisulfite Solution，將未甲基化胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶所需的時(shí)間從幾個(gè)小時(shí)減少到了30分鐘，含有的制備緩沖液無需在亞硫酸氫鹽處理前分離DNA。而且，亞硫酸氫鹽熱循環(huán)程序提供優(yōu)化的孵育步驟，可使DNA熱變性、磺基化以及胞嘧啶脫氨，使胞嘧啶轉(zhuǎn)化率超過99%。胞嘧啶轉(zhuǎn)化的最后一個(gè)步驟是脫磺基化，此過程可在純化流程時(shí)簡(jiǎn)單柱上完成。

DNA Protect Buffer

樣本DNA的快速、完全的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化對(duì)于正確確定甲基化模式是最關(guān)鍵的。這個(gè)過程需要將DNA在高濃度亞硫酸氫鹽、高溫、低pH條件下孵育。這些劇烈的條件經(jīng)常造成高度DNA片段化和純化時(shí)的DNA損失。普通亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化需要大量的起始DNA，以彌補(bǔ)轉(zhuǎn)化時(shí)的DNA降解和純化時(shí)的DNA損失，這常常導(dǎo)致DNA產(chǎn)量低、片段化高和不可重復(fù)的轉(zhuǎn)化率。使用EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits時(shí)，獨(dú)特的DNA Protect Buffer可在亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化時(shí)防止由于高溫、低pH值造成的DNA片段化。此緩沖液還可使DNA有效變性，得到完全胞嘧啶轉(zhuǎn)化所需的單鏈DNA。DNA Protect Buffer含有方便的pH指示劑，可確保胞嘧啶轉(zhuǎn)化時(shí)具有正確的pH（參見DNA Protect Buffer）。

福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）樣本的脫蠟

從福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）樣本中抽提DNA的第一步是脫蠟，石蠟先是被熔解再被去除，暴露出的樣本進(jìn)行后續(xù)的裂解液和蛋白酶K處理。EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit中含有的新型化學(xué)試劑Deparaffinization Solution可優(yōu)化福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片的去石蠟、裂解和解交聯(lián)過程。Deparaffinization Solution可獲得高DNA回收率，因?yàn)槿芤涸跇颖旧蠒r(shí)就可進(jìn)行蛋白酶K消化。由于無需沉淀福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）樣本或去除含有石蠟的上清，可避免脫蠟時(shí)的樣本損失風(fēng)險(xiǎn)。

操作流程

EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kit操作流程包括幾個(gè)簡(jiǎn)單的步驟：從樣本中制備DNA，未甲基化胞嘧啶的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化；轉(zhuǎn)化的單鏈DNA結(jié)合到MinElute DNA離心柱膜上；洗滌；膜上結(jié)合DNA的去磺基化；漂洗膜上結(jié)合DNA，去除去磺基化試劑；從離心柱上洗脫純化的轉(zhuǎn)化DNA。福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片、全血、細(xì)胞培養(yǎng)基或組織樣本的制備是不同的，但是提取DNA的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化流程對(duì)所有樣本類型都是相同的（參見Interconnected protocols of the EpiTect Fast DNA Conversion Kits）。所有實(shí)驗(yàn)方案可獲得相同的胞嘧啶轉(zhuǎn)化率，轉(zhuǎn)化DNA的純化也能獲得同等DNA回收，與DNA起始量無關(guān)。

試劑盒描述

EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit

EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit包括精心配制的緩沖液和試劑，可對(duì)基因組DNA進(jìn)行簡(jiǎn)潔、有效的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化和對(duì)轉(zhuǎn)化DNA的回收（參見EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit procedure）。新型Bisulfite Solution可在少至30分鐘內(nèi)進(jìn)行完全亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，運(yùn)用DNA Protect技術(shù)和QIAGEN離心柱可獲得很少降解的完全轉(zhuǎn)化DNA，在10 μl洗脫液中洗脫，用于需要高濃度的下游應(yīng)用。EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit在20 μl體系中可轉(zhuǎn)化1 ng–2 μg DNA，在最大40 μl體系中可轉(zhuǎn)化1–500 ng DNA。

EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit

EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit可處理福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織，EpiTect Fast FFPE Lysis Kit含有的專門緩沖液可有效去石蠟并裂解福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片（參見EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit procedure），EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit可對(duì)提取的DNA進(jìn)行快速、有效的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化。實(shí)驗(yàn)方案包括的優(yōu)化步驟便于DNA結(jié)合，可用于單個(gè)福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片（厚度為10 μm）。從福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織中提取DNA很難避免DNA片段化，后續(xù)亞硫酸氫鹽處理時(shí)的劇烈條件更會(huì)加重片段化。QIAGEN提供可靠地DNA Protect技術(shù)可最大程度減少轉(zhuǎn)化反應(yīng)造成的片段化，獲得更高產(chǎn)量的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化DNA。

EpiTect Fast LyseAll Bisulfite Kit

EpiTect Fast LyseAll Bisulfite Kit可處理全血、培養(yǎng)細(xì)胞或組織樣本，EpiTect Fast LyseAll Lysis Kit（參見EpiTect Fast 96 LyseAll Bisulfite Kit procedure）含有新型裂解緩沖液，EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit可對(duì)提取DNA進(jìn)行亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化。實(shí)驗(yàn)方案包括的優(yōu)化步驟便于DNA結(jié)合，獨(dú)特配制的裂解緩沖液使DNA從樣本中釋放更為簡(jiǎn)潔。此試劑盒可用于0.5–20 μl血液或10–10⁵個(gè)細(xì)胞（少至60 pg DNA）。

應(yīng)用

EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits可對(duì)各種起始材料的DNA進(jìn)行快速、有效的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，非常適合DNA甲基化分析的技術(shù)，包括：

 PCR：終點(diǎn)、Real-Time和甲基化特異性PCR

 亞硫酸氫鹽測(cè)序（直接和克?。?/span>

 COBRA (Combined Bisulfite Restriction Analysis)

 焦磷酸測(cè)序